棕榈科植物基因克隆方法的优化

• 作者: 夏薇 李静 杨耀东 王永 雷新涛
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 棕榈科植物 基因克隆 优化 胶回收率
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 2123-2128
• 页数: 6页
• 分类号: S565.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.12.2123

摘要

[目的]优化棕榈科植物基因克隆方法,为其基因组学研究和分子育种奠定基础.[方法]通过优化DNA提取和目的片段回收步骤,检测其对提取DNA质量和纯度、目的片段回收率与阳性克隆等的影响.[结果]DNA提取方法优化后,提取获得的DNA完整性好,无杂质、无弥散现象,质量较好,其OD260/OD280在1.88～1.93;优化前不同样品提取的DNA仅为40.0～60.0 ng/μL,优化后样品DNA在104.5～214.8 ng/μL,为优化前的2～3倍;目的片段回收方法经优化后,可以从扩增的PCR产物中回收获得条带较清晰的目的片段,其胶回收率较高;对回收的目的片段进行亚克隆,以gyspy74引物鉴定阳性克隆,每个样品的菌落均在700 bp左右扩增获得清晰的目的条带,且其中3个菌落的目的条带测序结果与预期核酸序列一致.[结论]优化后的方法适用于棕榈科植物基因克隆.