含 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌的制备及其稳定性研究

• 作者: 冯强生 哈小琴 张尚弟 杨志华 杨淑娟 杨迎桂 薛荣利 赵勇
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素 2 NK4 沙门菌菌苗 疫苗,减毒 基因
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 肿瘤生物治疗专栏
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: R186.9
• 字数: 4542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2014.07.009

摘要

目的：制备含 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒减毒沙门菌 TPIN 并检测其稳定性。方法将 pCMV-IL-2-IRES-NK4质粒转进减毒沙门菌 Ty21a 感受态,制备成重组的减毒沙门菌菌株 TPIN；将 TPIN 在含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)的 LB 培养板传代培养至第10代、20代、30代和40代时用灭菌的牙签分别挑取含有氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB 培养基上的单克隆菌落,质粒提取、PCR 扩增酶切鉴定；TPIN 转染 HepG2细胞后采用 RT-PCR 检测IL-2和 NK4基因表达,ELISA 法检测细胞培养上清 IL-2和 NK4蛋白。结果构建菌株经提取质粒、酶切、PCR 扩增获得目的基因 IL-2、NK4特异条带；在氨苄西林(+)和氨苄西林(-)LB 培养板传代培养40代的 TPIN 菌株均可扩增并双酶切出目的基因 IL-2及 NK4；TPIN 体外转染 HepG2细胞后,IL-2及 NK4表达水平均显著升高。结论重组携带IL-2/ NK4双基因的减毒沙门菌菌株 TPIN 可稳定遗传,不受无选择性压力的影响而丢失质粒,且在体外 IL-2、NK4基因及蛋白可以稳定高效表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵勇	兰州军区兰州总医院检验科	46	189	9.0	11.0
2	哈小琴	兰州军区兰州总医院检验科	118	351	8.0	12.0
3	薛荣利	兰州军区兰州总医院检验科	9	23	3.0	4.0
4	杨志华	兰州军区兰州总医院检验科	14	32	3.0	5.0
5	杨迎桂	兰州军区兰州总医院检验科	11	53	3.0	7.0
6	冯强生	兰州军区兰州总医院检验科	12	5	1.0	2.0
7	杨淑娟	兰州军区兰州总医院检验科	6	22	3.0	4.0
8	张尚弟	兰州军区兰州总医院检验科	4	6	1.0	2.0