人天然CD4+ CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

• 作者: 余琪琪 刘灵佳 向宇飞 周智广 易受南 胡瑛 苏欣
• 来源期刊: 中南大学学报（医学版）
• 关键词: 人天然CD4+CD25+调节性T细胞 体外扩增 表型标志 免疫抑制
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 818-824
• 页数: 7页
• 字数: 4182字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11817/j.issn.1672-7347.2014.08.011

摘要

目的:建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础.方法:免疫磁珠分离(MACS)方法从人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用.结果:扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增至1.02× 109±0.20×109),活性＞97％.扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征:CD4+CD25+FoxP3+三阳细胞约占(94.22±2.12)％,与新鲜分选细胞相似.扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25-T细胞的增殖均有明显的抑制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P＜0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4+CD25-T细胞的抑制率无明显差异(P＞0.05).结论:创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗.