内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定

• 作者: 其布日 姚睿原 朝格图 王彦凤 王志钢 郭志新 鲍文蕾
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 内蒙古白绒山羊 成纤维细胞生长因子V(FGF5) 短发夹RNA 荧光定量PCR 载体构建
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1793-1798
• 页数: 6页
• 分类号: S827.2
• 字数: 3306字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.11.008

摘要

旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子V (Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA).以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因.设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNAT-shRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5 mRNA表达量.结果表明:克隆获得813 bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸.核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99％.FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功.重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48 h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P＜0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应.综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	其布日	内蒙古大学生命科学学院	5	12	2.0	3.0
2	王志钢	内蒙古大学生命科学学院	37	232	8.0	14.0
3	王彦凤	内蒙古大学生命科学学院	8	14	2.0	3.0
4	朝格图	内蒙古大学生命科学学院	10	85	5.0	9.0
5	姚睿原	内蒙古大学生命科学学院	4	4	2.0	2.0
6	鲍文蕾	内蒙古大学生命科学学院	3	5	2.0	2.0
7	郭志新	内蒙古大学生命科学学院	3	4	2.0	2.0