棉铃虫（Helicoverpa armigera）FK506结合蛋白基因的克隆、表达与纯化

• 作者: 刘小宁 朱燕 李芬 赵文博 赵洁
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 棉铃虫 FK506结合蛋白基因 单酵母杂交
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 115-120
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

为了深入了解FK506结合蛋白基因的作用和探索调控棉铃虫CYP6B6的表达机制，基于单酵母杂杂交结果采用RT-PCR的方法从棉铃虫的中肠cDNA中扩增得到了FK506结合蛋白基因，将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET32a中，在大肠杆菌BL21中用异丙基-β-D-硫代半乳糖（IPTG）诱导表达，通过镍柱离子亲和层析纯化目的蛋白。用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达和纯化结果，并用Western blotting进行验证。结果表明，克隆得到的目的基因大小为327 bp，编码108个氨基酸残基，预测蛋白质分子量和等电点分别是11.78 kD和7.87。氨基酸序列分析表明该序列具有完整的开放阅读框，且没有信号肽。重组质粒pET32a-FKBP在大肠杆菌BL21中获得表达，主要以可溶性形式存在，经亲和层析柱纯化获得目的蛋白，Western blotting检测发现纯化的目的蛋白大小正确且纯度高。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘小宁	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	45	144	6.0	10.0
2	赵洁	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	12	15	2.0	3.0
3	李芬	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	10	40	3.0	6.0
4	朱燕	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	5	9	2.0	2.0
5	赵文博	新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室	1	2	1.0	1.0