兔角膜内皮细胞球形培养的活性和细胞表型

• 作者: 傅婷 刘庆 杨艳 王婵 郭永龙 陈建苏
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 角膜内皮细胞 球形培养 三维 细胞活性 细胞表型
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 786-790
• 页数: 5页
• 字数: 4509字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.09.004

摘要

背景 组织工程角膜内皮层的构建和细胞注射疗法需要足够数量的角膜内皮细胞(CECs),因此如何在体外培养大量高活性的角膜内皮种子细胞是当前亟需解决的问题. 目的 建立兔CECs高活性三维(3D)球形培养方法,探索培养细胞的生物学特性. 方法 酶消化法分离和培养兔CECs并进行传代,经低黏附振动培养法产生兔CECs球,倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态;采用扫描电子显微镜观察CECs球的表面超微结构;用吖啶橙染色法鉴定CECs球中细胞的活性;采用CCK-8试剂盒检测细胞的吸光度(A450)值,判断细胞的增生情况.将CECs球接种到6孔细胞培养板贴壁培养1周,球形培养的细胞为球形培养组,常规培养的细胞为常规培养组.采用免疫荧光法检测闭锁小带蛋白1(ZO-1)和Na+/K+-ATP酶在细胞中的表达.结果 经球形培养的CECs呈聚集生长,培养1周细胞形态为六角形或多边形,融合成单层,呈铺路石状排列;扫描电子显微镜下可见兔CECs球体周围有细胞爬出,未长散的细胞球中细胞与细胞之间结合紧密,球体表面凹凸不平.吖啶橙染色表明,细胞球中90％细胞呈绿色荧光;球形培养组细胞平均A450值为1.524±0.013,常规培养组细胞平均A450值为1.265±0.021,球形培养组细胞增生值明显增加,2个组间差异有统计学意义(t=-3.436,P=0.010).免疫荧光检测表明,培养的细胞中ZO-1和Na+/K+-ATP酶阳性细胞膜对FITC呈绿色荧光,细胞核DAPI染色呈蓝色荧光.结论 CECs的3D球形培养方法培养的细胞可保持细胞的高活性、高增生能力和细胞表型,为构建组织工程角膜内皮及细胞疗法提供了更好的角膜内皮种子细朐.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈建苏	暨南大学第一临床医学院眼科研究所	62	385	12.0	16.0
2	刘庆	暨南大学第一临床医学院眼科	10	41	3.0	6.0
3	杨艳	暨南大学第一临床医学院眼科	6	35	3.0	5.0
4	郭永龙	暨南大学第一临床医学院再生医学教育部重点实验室	6	15	3.0	3.0
5	傅婷	暨南大学第一临床医学院眼科研究所	3	14	2.0	3.0
6	王婵	暨南大学第一临床医学院再生医学教育部重点实验室	5	11	2.0	3.0