油茶3羟酰CoA脱水酶基因的克隆与表达分析

• 作者: 刘凯 曾艳玲 王建勇 谭晓风 陈鸿鹏 龙洪旭
• 来源期刊: 植物生理学报
• 关键词: 油茶 3羟酰CoA脱水酶 克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1574-1584
• 页数: 11页
• 语种: 中文

摘要

3羟酰CoA脱水酶是一类催化3羟酰CoA脱水转化成为烯酰CoA形式的酶。本研究以国审油茶品种‘华硕’种子为材料,在已构建的转录组和表达谱数据库的基础之上,采用RACE技术,克隆到一个油茶3羟酰CoA脱水酶基因的cDNA全长,命名为CoHCD (GenBank登录号KJ910336)。该基因cDNA全长为1145 bp,含有666 bp的开放读码框,编码221个氨基酸,分子量为25.2 kDa,理论等电点pI为9.4,疏水残基占整个氨基酸残基的48.9%,是亲水性蛋白,具有4个比较明显的跨膜区和蛋白质酪氨酸磷酸酶基序“HGXXGXXRS”。在基因cDNA全长序列的基础上,分别成功地构建了原核表达载体、超表达载体和RNA干扰载体,其中,原核表达载体在宿主细胞BL21(DE3)上成功诱导表达,获得表观分子量约为25 kDa的相应目的蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,在5个不同发育时期的油茶种子中CoHCD高效表达主要集中在8~10月,转录最高峰发生在9月,其表达量在种子发育过程中呈增加趋势。