柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用

• 作者: 林雄杰 王宗华 王贤达 胡菡青 范国成
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柑橘黄龙病菌 钙黄绿素 环介导等温扩增(LAMP) 可视化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 918-924
• 页数: 7页
• 分类号: S436.66
• 字数: 6689字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.05.015

摘要

建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持.根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试.该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增.对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×1O-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍.利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果2种技术的检出率均为76.7％,符合率达到100％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范国成	福建省农业科学院果树研究所	47	319	8.0	17.0
2	胡菡青	福建省农业科学院果树研究所	65	392	11.0	16.0
3	王宗华		74	760	17.0	25.0
4	王贤达	福建农林大学植物保护学院	29	64	4.0	7.0
6	林雄杰	福建省农业科学院果树研究所	35	111	6.0	8.0