核酸内切酶改良型彗星实验用于检测遗传毒物致DNA氧化损伤

• 作者: 戴宇飞 李红丽 段化伟 牛勇 翟庆峰 赵健 邱玉刚 郑玉新
• 来源期刊: 中华预防医学杂志
• 关键词: 诱变剂 DNA 核酸内切酶 氧化损伤 彗星实验
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 208-212
• 页数: 5页
• 字数: 4703字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-9624.2014.03.011

摘要

目的 建立核酸内切酶改良型体外彗星实验方法,并应用该方法检测DNA氧化损伤.方法 分别应用苯并[a]芘[B(a)P,20 μmol/L]、甲基磺酸甲酯[MMS,25 μg/ml]、秋水仙素(COL,5 mg/L)和长春新碱(VCR,0.5 mg/L)处理人支气管上皮(16HBE)细胞.采用噻唑蓝(MTT)实验评估细胞生存率,常规彗星实验和内切酶改良型彗星实验分别检测DNA损伤和氧化损伤,流式细胞术检测细胞内活性氧改变.结果 MTT实验显示,B(a) P、MMS、COL、VCR染毒后可引起较高水平的细胞内活性氧升高,4个组的细胞生存率分别为:(59.69±2.60)％、(54.33±2.81)％、(53.11±4.00)％、(51.43±3.92)％.常规彗星实验及甲酰胺嘧啶-DNA-糖基化(formamidopyrimidine-DNA-glycosylase,FPG)酶彗星实验均检测到B(a)P、MMS、COL、VCR引发的DNA损伤.FPG酶彗星实验中,Olive尾矩改变最明显,缓冲液组的B(a) P、MMS、COL、VCR组Olive尾矩分别为22.99±17.33、31.65±18.86、19.86 ±9.56和17.02 ±9.39,FPG酶处理后Olive尾矩分别为34.50±17.29、43.80±10.06、33.10±12.38和28.60±10.53,较缓冲液组分别增加58.94％、38.48％、66.86％和68.21％(t值分别为3.91、3.89、6.66和3.87,P值均＜0.05).相关性分析显示,Olive尾矩与细胞内活性氧也有较好的相关性(r=0.77,P＜0.05).结论 FPG酶改良型彗星实验可以有效的检测遗传毒物所致的DNA氧化损伤改变.