大鼠烟曲霉菌性角膜炎初期核苷酸结合寡聚域样受体在角膜中的表达及其免疫防御作用

• 作者: 刘莹 林静 渠晓黎 王楠 许正杰 赵桂秋 高昂
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 烟曲霉菌 眼部感染,真菌 角膜炎 核苷酸结合寡聚域 天然免疫 大鼠
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 870-875
• 页数: 6页
• 字数: 5917字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.10.002

摘要

背景 核苷酸结合寡聚域(NOD)样受体(NLRs)在天然免疫过程中发挥重要作用,但其在真菌性角膜炎发生和发展过程中的作用研究少见. 目的 研究NOD2在大鼠烟曲霉菌性角膜炎(AFK)角膜组织中的表达及作用.方法 72只成年清洁级Wistar大鼠按照随机数字表法随机分为正常对照组、单纯角膜上皮损伤组和AFK模型组,均以右眼作为实验眼.正常对照组12只大鼠中选取6只仅刮取角膜上皮用于逆转录PCR(RT-PCR)实验,另6只大鼠制备角膜标本用于组织病理学检查、免疫组织化学和免疫荧光染色实验.单纯角膜上皮损伤组共30只大鼠,仅刮除中央角膜上皮,AFK模型组大鼠共30只,刮除角膜上皮后接种烟曲霉菌标准株.分别于实验后4、8、16、24 h选取各组6只大鼠刮取角膜上皮,采用RT-PCR法检测角膜中NOD2mRNA的表达,其他6只于实验后24 h制备角膜标本,采用免疫组织化学法和免疫荧光染色法检测角膜中NOD2蛋白的表达,并将各组检测结果进行比较.实验后4、8、16、24 h分别摘除各组大鼠右眼眼球,制作角膜标本进行常规组织病理学检查.结果 裂隙灯显微镜下观察各组大鼠各时间点的角膜情况,均造模成功.RT-PCR结果显示,正常对照组角膜仅有微量NOD2 mRNA的表达,单纯角膜上皮损伤组和AFK模型组大鼠角膜中NOD2 mRNA的相对表达量明显增加,且在实验4、8、16、24 h,AFK模型组大鼠角膜中NOD2 mRNA的相对表达量均明显高于单纯角膜上皮损伤组,差异均有统计学意义(t=-0.409、-0.439、-0.534、-0.618,均P=0.000).大鼠角膜组织病理学检查显示,正常对照组大鼠角膜结构完整;单纯角膜上皮损伤组可见到少部分角膜上皮缺损、前弹力层皱褶及角膜轻度水肿,有少量中性粒细胞浸润;AFK模型组大鼠可见角膜溃疡,角膜水肿增厚,浅基质层可见大量中性粒细胞浸润.免疫组织化学染色和免疫荧光染色结果均显示,正常对照组大鼠角膜上皮和内皮层仅有微弱NOD2蛋白的表达,单纯角膜上皮损伤组大鼠NOD2蛋白表达稍增强,AFK模型组大鼠NOD2蛋白表达明显增强.3个组大鼠角膜中NOD2蛋白表达量(A值)分别为0.045±0.005、0.050±0.005和0.092±0.006,其中AFK模型组大鼠NOD2蛋白表达量明显高于单纯角膜上皮损伤组,差异有统计学意义(t=0.042,P=0.000). 结论 NOD2参与了大鼠AFK的早期病变过程,可能在角膜抗真菌感染的天然免疫阶段中发挥一定的作用.