猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用

• 作者: 何孔旺 刘浩飞 孙冰 张雪寒 李彬 杜露平 温立斌 茅爱华 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 TaqMan荧光定量PCR 流行病学调查
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 125-129
• 页数: 5页
• 分类号: S858.28
• 字数: 2640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2014.01.021

摘要

为定量检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),建立了检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法.根据PEDV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应.结果表明,该试验建立的荧光定量PCR方法在lμl 101 ～ 109拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上,扩增效率在90％与100％之间.该方法的检测灵敏度为10拷贝,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高,而且该检测方法特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应,批内和批间的变异系数均低于3％,表明该方法的重复性较好.对华东地区采集的130份临床样品进行检测,结果显示,PEDV的阳性率为63.1％.