猪TTV2 ORF1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 周忠涛 张文文 张雪寒 李彬 汪伟 温立斌 王小敏 肖琦 郭容利
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪TTV2 ORF1基因 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 119-124
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2014.01.020

摘要

为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2) ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTv2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-gl,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定.将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价.PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确；重组蛋白质分子量为5.2× 104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95％以上,具有较好的抗原性；制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1:12800.重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原.