柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5A基因的克隆表达及转录动态分析

• 作者: 于三科 林青 殷昊 苟灵俏 蔡建平 马雪婷 龚振兴
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 柔嫩艾美耳球虫 真核起始因子 基因克隆 表达差异 qRT-PCR
• 年，卷（期）: 2014,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 2019-2027
• 页数: 9页
• 分类号: S855.9
• 字数: 5150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.12.016

摘要

旨在研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在Etenella广东株不同发育阶段的表达量变化.根据E.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达.提取E.tenella5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化.测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486 bp,各自编码31 5和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达.qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在E.tenella不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低.首次克隆获得了E.tenella eIF5和eIF5AORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异.试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础.