荧光定量PCR检测新生儿干血斑中巨细胞病毒DNA方法的建立及评价

• 作者: 俞蕙 叶丽静 徐锦 曹凌峰 苏犁云 董妞妞 董左权 钟华清
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 巨细胞病毒感染 巨细胞病毒 DNA,病毒
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 261-265
• 页数: 5页
• 字数: 3839字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.04.006

摘要

目的 建立荧光定量PCR检测新生儿干血斑中巨细胞病毒(CMV)DNA的实验方法,并评价方法的最低检测限、精密度、特异性和临床应用能力.方法 确立CMV-gB段的引物和探针,构建标准质粒,检测CMV毒株的浓度.荧光定量PCR法检测10倍梯度稀释的病毒株干血斑,获得方法的最低检测限和批内、批间精密度.2011年9月至2013年2月收集复旦大学附属儿科医院10份确诊先天性CMV感染以及120份普通人群中出生3d内的新生儿干血斑标本,以本方法进行验证.结果 CMV DNA的最低检测限为4.44×103拷贝/ml;检测灵敏度为2.66拷贝/25μl反应体系.CMV毒株浓度为4.44×106拷贝/ml时检测CMV DNA的批内、批间精密度分别为0.74％和1.39％;CMV毒株浓度为4.44 ×104拷贝/ml时批内、批间精密度分别为1.04％和1.84％.10份确诊先天性CMV感染的标本中,8份CMV DNA阳性;120份新生儿标本中,2份CMV DNA阳性.阳性标本经套式PCR复测以及测序验证均为CMV阳性.结论 成功建立了一种可用干血斑中微量CMV检测的荧光定量PCR法,该方法快速、灵敏、精密度高,适用于大规模新生儿先天性CMV感染的筛查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	苏犁云	复旦大学附属儿科医院临床检验中心	15	173	7.0	13.0
2	俞蕙	复旦大学附属儿科医院感染传染科	107	882	17.0	25.0
3	曹凌峰	复旦大学附属儿科医院临床检验中心	17	181	8.0	13.0
4	叶丽静	复旦大学附属儿科医院感染传染科	5	37	5.0	5.0
5	董妞妞	复旦大学附属儿科医院临床检验中心	7	37	5.0	6.0
6	钟华清	复旦大学附属儿科医院临床检验中心	10	57	5.0	7.0
7	董左权	复旦大学附属儿科医院临床检验中心	3	32	3.0	3.0