全反式维甲酸诱导的Cx43基因在RB细胞中的过表达及其对RB生长的抑制作用

• 作者: 唐罗生 李立
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 全反式维甲酸 视网膜母细胞瘤 细胞间隙连接 动物模型
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 910-915
• 页数: 6页
• 字数: 5934字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.10.011

摘要

背景 诱导细胞间隙连接蛋白(Cx)基因在瘤细胞中过表达是全反式维甲酸(ATRA)抑制肿瘤细胞生长的重要机制.我们先前的研究已证实,ATRA抑制视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、分化作用的机制与诱导Cx43过表达有关,但药物作用位点及其对在体肿瘤组织生长的影响尚未明确. 目的研究ATRA对RB细胞中Cx43基因及其蛋白表达的影响,探讨其作用机制. 方法 用无水乙醇将ATRA溶解并配制成浓度为1×10-2 mol/L的溶液,使用前再用细胞培养液配制成不同浓度ATRA液.用含体积分数10％热灭活胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养液常规培养人RB细胞株HXO-RB44,将1×10-5、1×10-6和1×10-2mol/L的ATRA分别加至培养基中,分别于添加后2、4、6d采集细胞,分别采用Western blot法和逆转录PCR法检测细胞中Cx43蛋白及mRNA的表达变化.选取15只BALB/c裸鼠,将RB细胞悬液1μl(含5×105个细胞)进行裸鼠右眼前房注射,建立裸鼠眼前房RB模型.将造模成功的11只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和1×10-5 mol/L ATRA组,阴性对照组和1×10-5 mol/L ATRA组裸鼠分别行0.5％无水乙醇的生理盐水或1×10-5 mol/L ATRA前房注射,每3天1次,共注射3周,裂隙灯显微镜下观察各组裸鼠肿瘤生长情况;实验结束时摘除实验眼,用苏木精-伊红染色法进行组织病理学检查. 结果 Western blot法检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43蛋白表达量(ACx43/AGAPDH)均逐渐增加,总体比较差异有统计学意义(F时间=71.31,P=0.00;F分组=7.66,P=0.00);药物作用后2 d 1×10-5 mol/L ATRA组、作用后4 d 1×10-6 mol/L ATRA组、作用后6 d 1×10-7 mol/L ATRA组Cx43蛋白表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(￡=3.34,P＜0.01;t=2.33,P＜0.05;t=3.12,P＜0.01).逆转录PCR检测结果显示,随ATRA作用时间的延长,各组Cx43 mRNA表达量(ACx43mRNA/Aβ-actin)均逐渐升高,差异均有统计学意义(F时间=90.90,P=0.00;F分组=6.86,P=0.00),药物作用后2 d 1×10-5 mol/L ATRA组、作用后4 d 1×10-6mol/L ATRA组和1×10-7mol/LATRA组Cx43 mRNA表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(t=3.57,P＜0.01;t=6.31,P＜0.01;t=2.22,P＜0.05).RB细胞悬液前房注射后6～9d,11眼成功建立裸鼠RB肿瘤模型,造模后20 d,空白对照组裸鼠肿瘤长满前房,眼球突出;而同时间点1×10-5 mol/L ATRA组肿瘤生长仅占前房的1/2.组织病理学检查发现,空白对照组裸鼠肿瘤细胞充满前房、后房和玻璃体腔,而1×10-5 mol/L ATRA组裸鼠肿瘤主要在前房生长,后房及玻璃体腔内未见瘤细胞. 结论 ATRA在转录水平诱导RB细胞中Cx43表达的上调,从而抑制和限制裸鼠前房RB肿瘤的生长.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐罗生	中南大学湘雅二医院眼科	204	794	12.0	19.0