毛果杨腺苷酸合成酶基因ACS-1的克隆和酶学分析

• 作者: 王昱堃 陆海 魏弘宜
• 来源期刊: 西北林学院学报
• 关键词: 毛果杨 ACS 4CL 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 林木遗传育种与培育
• 页码范围: 78-83
• 页数: 6页
• 分类号: S718.43
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7461.2014.05.14

摘要

乙酰辅酶A连接酶(ACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族,与4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)有着紧密的进化关系.通过对毛果杨数据库中4CL基因的同源检索,克隆获得了毛果杨基因Prt4CL8的序列(命名ACS-1,Genebank登录号XM _002329288.1).序列分析表明,ACS-1具有ACS的关键残基以及C端末尾的PTS1序列;而4CL的高度保守结构域box Ⅰ和boxⅡ在该蛋白中不保守.利用PCR技术克隆序列,构建表达载体pET30a,转化大肠杆菌并表达重组蛋白.对其进行酶学活性分析,结果证明该蛋白不能催化4CL常见底物,而对ACS底物乙酸钠具有明显催化活性:Km为(0.25±0.02)mmol·L-1;Vm为(8.63±0.63) mmol·L-1.结果表明,ACS1是ACS家族成员,为腺苷酸合成酶超基因家族成员的鉴定与功能分析提供了一定的理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆海	北京林业大学生物科学与技术学院	69	729	14.0	24.0
2	王昱堃	北京林业大学生物科学与技术学院	2	7	1.0	2.0
3	魏弘宜	北京林业大学生物科学与技术学院	3	11	2.0	3.0