胞外高浓度ATP诱导SH-SY5Y细胞的自噬和凋亡

• 作者: 卢娜 李东亮 李新娟 李超堃 白瑞樱 赵红岗 魏林郁
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺苷三磷酸 SH-SY5 Y细胞 自噬 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1388-1393
• 页数: 6页
• 分类号: R363.21
• 字数: 4802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2014.08.009

摘要

目的：观察胞外高浓度ATP损伤人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用，探讨损伤中自噬和凋亡发生的规律和特点。方法：培养的SH-SY5Y细胞按照加入ATP的浓度和作用时间进行分组。 CCK-8法检测细胞生存率，单丹磺酰戊二胺染色检测自噬空泡的变化，Hoechst 33258染色检测细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡率变化，蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（ caspase-3）及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（ microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）与对照组相比，不同浓度（3、6、9、12、15 mmol/L）的ATP作用3 h均使SH-SY5Y细胞存活率明显降低，且呈剂量依赖性；不同作用时间（1、2、3、6 h）ATP（6 mmol/L）也可使SH-SY5Y细胞存活率明显降低，3 h达高峰，呈时间依赖性。（2） ATP作用1 h时SH-SY5Y细胞自噬空泡显著增多（P＜0.05），随时间延长，6 h时降到对照水平；ATP作用1 h时，LC3-Ⅱ表达显著增强（P＜0.05），形成高峰，与自噬空泡增多的时点重合，2 h、3 h时LC3-Ⅱ表达水平逐渐减弱，6 h时降到对照水平。（3）与对照组相比，ATP作用3 h后细胞凋亡率达高峰（P＜0.05），6 h时仍然保持在3 h的水平；cleaved caspase-3表达量同步增强（P＜0.05），6 h时达高峰。结论：胞外高浓度ATP能够诱导SH-SY5Y细胞自噬和凋亡；自噬增强在前，凋亡高潮在后；随着ATP作用时间的延长，凋亡占主导地位。