抗疟原虫单抗M26-32 IgM的单体化及其免疫学特性研究

• 作者: 刘耀宝 夏惠 徐岁 方强 陶志勇 顾亚萍 高琪
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 疟疾 单克隆抗体 M26-32 IgM 胶体金
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 551-555,567
• 页数: 6页
• 分类号: R382.3+1
• 字数: 4672字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.06.002

摘要

目的 改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原.方法 复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集合有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗成单体IgM亚单位.经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原.结果 接种20只小鼠,共采集约80 mL单抗腹水,经Hi-Trap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26-32单抗.经L-半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别.经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1∶100稀释的恶性疟原虫和1∶10稀释的间日疟原虫可溶性抗原.结论 建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26-32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础.