bFGF联合EGF对人肠神经嵴前体细胞增殖及分化能力的影响

• 作者: 李鹏 段怡涛 潘伟康 王怀杰 郑百俊 高亚 黄强 龚伟
• 来源期刊: 中华小儿外科杂志
• 关键词: 先天性巨结肠 细胞移植 神经嵴
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 先天性巨结肠专题
• 页码范围: 509-513
• 页数: 5页
• 字数: 4282字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2014.07.008

摘要

目的 观察表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人肠神经嵴前体细胞(hENCP)在体外增殖和分化能力的影响,对人ENCP的体外分离培养、传代以及分化特点等基础研究进行探索,为巨结肠患儿自体细胞移植治疗提供实验依据.方法 收集胎龄＞8周非药物流产胎儿,消化后制成单细胞悬液,体外培养3、5、7d后分别观察hENCP在不同生长因子作用下形成的克隆球数量、体积.MTT法观察hENCP在1周内OD值变化曲线.荧光免疫组织化学法p75NTR(鉴定hENCP)、peripherin(鉴定肠神经元)、GFAP(鉴定胶质细胞)抗体染色.结果 能够从胎儿肠壁分离出少量细胞,经体外培养增殖形成克隆球.bFGF联合EGF培养下hENCP的克隆球数量、体积在各个时间点均明显大于单独添加EGF (P＜0.01)或bFGF培养的克隆球(P＜0.01).bFGF+ EGF联合培养的hENCP OD值在各时间点均高于其他各组.克隆球中含有p75NTR免疫阳性细胞(hENCP),并在体外血清诱导下可分化为peripherin免疫阳性细胞(肠神经元)、GFAP免疫阳性细胞(神经胶质细胞).bFGF组分化为神经元的百分率明显高于其他各组(P＜0.01),EGF组分化为神经胶质细胞的百分率明显高于其他各组(P＜0.01).结论 人胚肠壁中存在具有自我更新能力的ENCP,其在体外可分化为神经元和神经胶质细胞.EGF+ bFGF对hENCP有明显的促进增殖作用,bFGF、EGF对体外定向诱导hENCP分化细胞类型具有不同促进作用.