抗血管生成作用的VEGFxxxb在缺氧视网膜色素上皮细胞中的表达

• 作者: 何守志 范思均
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 血管内皮生长因子A/基因 选择性剪接/生理功能 细胞株/视网膜色素上皮细胞 抗血管生成因子 蛋白亚型/代谢
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1014-1020
• 页数: 7页
• 字数: 7046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.11.011

摘要

背景 缺氧可诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子A(VEGF-A),从而促进脉络膜新生血管(CNV)形成.VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb,但后者在常氧和缺氧状态下在人RPE细胞中的表达变化及其作用尚不清楚.目的 从mRNA水平和蛋白水平检测模拟缺氧状态培养的RPE细胞中VEGFmb的表达,研究VEGFxxxb在常氧和缺氧培养的RPE细胞中的表达变化.方法 以人RPE细胞系ARPE-19为研究对象,将150 μmol/L化学诱导剂CoC12加入细胞培养液制备缺氧细胞模型,分别于0h(常氧培养)及缺氧培养3、6、12和24 h收获细胞或细胞上清液,采用逆转录PCR(RT-PCR)法检测细胞内VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达;采用Western blot法检测细胞内总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的表达;采用ELISA法检测细胞上清中总VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白的含量.结果 在常氧及诱导缺氧后,ARPE-19细胞中均可检测到VEGFxxxmRNA和VEGFxxxb mRNA的表达,检测出的VEGFxxxmRNA中同时出现VEGF121、VEGF165和极微弱的VEGF189条带;检出的VEGFxxxb mRNA中可见VEGF165b条带.缺氧培养的细胞中随着缺氧时间的延长,VEGFxxxmRNA显示出表达逐渐增加的趋势,而VEGFxxxb mRNA则显示出表达逐渐减少的趋势.Western blot法可检测到细胞中VEGFxxxb蛋白的表达,尤以VEGF165b表达最强,随缺氧培养时间的延长,VEGF165b蛋白表达逐渐减少.培养的细胞上清中VEGFxxxb蛋白质量浓度由常氧培养时的(166.82±2.55) pg/ml下降至缺氧培养24 h的(125.35±2.10)pg/ml,而总VEGF-A蛋白则由(294.27±11.97) pg/ml上升至(582.26±12.98) pg/ml.细胞中VEGFxxxbb蛋白占总VEGF-A蛋白的比例随缺氧培养时间的延长,由常氧培养条件下的(56.71±1.02)％逐渐下降至缺氧培养24 h的(21.53±0.08)％.结论 ARPE-19细胞在常氧和缺氧培养条件下均可检测到VEGFxxxbb mRNA和蛋白的表达.缺氧培养后ARPE-19细胞中VEGFxxx mRNA的表达水平逐渐降低.常氧培养时细胞中总VEGF-A蛋白以VEGFxxxbb占主导,而缺氧后VEGFxxxbb占总VEGF-A比例下降.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何守志	解放军总医院眼科	72	456	11.0	18.0
2	范思均	解放军总医院眼科	6	39	3.0	6.0