摘要:
目的:研究二甲双胍对人食管癌Eca109细胞凋亡、迁移及侵袭方面的潜在影响,并初步探讨可能机制.方法:人食管癌Eca109细胞常规培养,MTT法测0、1、5、10、20和40 mmol/L二甲双胍培养基细胞生长曲线;细胞划痕实验检测10 mmol/L二甲双胍对细胞迁移能力的影响(不加二甲双胍为对照);Boyden-Chamber分析法测定10 mmol/L二甲双胍对细胞体外侵袭能力;流式细胞仪检测0、5、10和20 mmol/L二甲双胍对食管癌细胞凋亡率的影响,并进行Caspase-3活性检测;抽提mRNA以RT-PCR(reverse transcription,PCR)检测相关基因的mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测Bax和Bcl-2蛋白表达.结果:MTT结果显示,二甲双胍对Eca109细胞的增殖抑制呈剂量和时间依赖性,P<0.001,其中半数有效抑制率IC50约为10 mmol/L;细胞划痕实验结果显示,10 mmol/L二甲双胍和对照组划痕12(t=6.298,P<0.001)、24(t=5.637,P<0.001)和48 h(t=8.981,P<0.001)细胞迁移指数差异均有统计学意义;侵袭实验显示,10 mmol/L二甲双胍穿过ECM凝胶滤膜的细胞数量为21.3±6.2,对照组为106.8±8.1,差异有统计学意义,t=32.306,P<0.001;流式细胞仪检测结果显示,不同浓度二甲双胍凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义,F=398.015,P<0.001;Caspase-3活性检测结果显示,二甲双胍组Caspase-3活性与对照组相比显著增加,F=247.849,P<0.001;PCR结果显示,与对照组相比,Bax和Caspase-3的mRNA的表达升高,Bcl-2、MMP-2和MMP 9的mRNA的表达降低,差异均有统计学意义;实验组凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax灰度值的比值与对照组相比,差异有统计学意义,F=121.819,P<0.001,且呈浓度依赖性.结论:二甲双胍对食管癌Eca109细胞的增殖抑制呈剂量和浓度依赖性,并降低食管癌细胞迁移与侵袭能力,其可能与上调或下调某些相关基因和蛋白的表达有关.