里氏木霉纤维二糖水解酶基因cbh1的分子改造

• 作者: 张穗生 陈东 陈小玲 雷富 黄俊
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 里氏木霉 纤维素酶 纤维二糖水解酶基因 分子改造 碱基突变
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 1739-1743
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2014.10.1739

摘要

[目的]用分子改造的方法改造里氏木霉(Trichoderma reesei的纤维二糖水解酶基因cbh1,提高其纤维素酶活力,为工业化生产纤维素酶提供参考.[方法]用DNaseI消化里氏木霉cbh1,回收100 bp左右的片段后用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行PCR扩增,将PCR改造的cbh1基因转化里氏木霉原生质体,使改造的cbh1基因与里氏木霉原有的cbh1基因发生同源重组.通过比较滤纸酶活力的方法筛选纤维素酶活力提高的突变菌株,在NCBI上比对分析突变菌株的cbh1序列.[结果]经克隆测序获得基因片段大小为637 bp,与里氏木霉同属菌株cbh1基因的相似性在88‰98％,确定为里氏木霉cbh1的基因片段.经DNaseI消化15 min、T4 DNA连接酶连接、经PCR扩增获得改造后的cbh1基因.将改造cbh1基因片段转化里氏木霉原生质体,得到cbh1基因突变体库.从cbh1基因突变体库中筛选获得1株纤维素酶滤纸酶活比出发菌株高1.7518倍的突变菌株E2-1.序列比对分析发现,与出发菌株相比,突变菌株E2-1的cbh1基因有14个碱基发生了突变,其中5个碱基为置换突变,8个碱基为缺失突变,1个碱基为插入突变,分布于cbh1基因的9个位置.[结论]改造后的cbhl因能与里氏木霉的染色体DNA发生同源重组,进而提高突变菌株的纤维素滤纸酶活力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	雷富	广西科学院广西近海海洋环境科学重点实验室	30	223	9.0	13.0