MuSK-mCherry融合荧光蛋白的构建及对重症肌无力患者MuSK抗体的检测

• 作者: 孟繁平 李红花 李芳芳 王岩 许嘉珍 金权鑫 金松竹 魏枫
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重症肌无力 肌肉特异性激酶 荧光蛋白 肌肉特异性激酶-红色荧光蛋白融合蛋白
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1369-1373
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 4119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2014.10.015

摘要

目的：构建肌肉特异性激酶（MuSK）与红色荧光蛋白（mCherry）的重组融合蛋白（MuSK-mCherry），并作为抗原用于重症肌无力（ MG）患者血清中的MuSK抗体（ MuSKAb）的检测。方法：应用PCR技术，从含有mCherry 基因的载体pRSET-B扩增mCherry基因，经T载体（pGEM-T Easy Vector）克隆至含有MuSK细胞外区第22-452位氨基酸肽段基因的载体pMT/BiP/V5-His（ MuSK）上，构建MuSK-mCherry融合荧光蛋白基因。将重组载体转染果蝇S2细胞，表达产物以共聚焦显微镜检查。以MuSK-mCherry融合蛋白作为抗原，应用荧光免疫沉淀试验检测MG患者MuSKAb。结果：成功地构建了MuSK-mCherry融合蛋白基因，并得到了表达。经对已知MuSKAb阳性的MG患者血清中的MuSKAb的检测证实，构建的MuSK-mCherry融合蛋白在荧光免疫沉淀试验中可以检测到MuSKAb。结论：以MuSK细胞外肽段与mCherry构建的融合荧光蛋白作为抗原，可以用于MG患者血清中的MuSKAb的检测。