IBDV感染鸡后外周血淋巴细胞PD-1及其配体PD-L1/PD-L2转录变化的初步分析

• 作者: 孙国鹏 岳锋 张艳芳 朱艳平 李博文 杨媛 王爱国 郭东光 银梅
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 传染性法氏囊病病毒 PD-1 PD-L1 PD-L2
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 654-660
• 页数: 7页
• 分类号: S858.315.3
• 字数: 5011字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.021

摘要

建立鸡PD-1及配体PD-L1/PD-L2 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法,并用所建立的方法研究和分析雏鸡感染IBDV的不同阶段体内PD-1及配体PD-L 1/PD-L2的转录变化.根据GenBank中PD-1、PD-L1和PD-L2的基因序列,分别设计特异引物扩增目的基因,得到各自阳性克隆质粒,以阳性质粒作为标准品建立标准曲线,并进行敏感性、特异性和重复性试验.应用所建立的实时荧光定量RT-PCR方法对4周龄健康雏鸡人工感染IBDV后第3、5、7、10天PBMC中PD-1及配体PD-L 1/PD-L2的转录变化进行检测,同时用半定量RT-PCR方法以及IBDV快速检测试纸条对病毒感染后各时间点法氏囊组织中IBDV的载量进行检测.结果表明,建立的方法在1×101～1×109 copies·μL-1模板范围内具有良好的线性关系(R2＞0.99),可检测至少101copies·μL-1的阳性标准样品,且具有较好的特异性和重复性.IBDV感染后,病毒在雏鸡体内复制逐渐增加,至第5天病毒载量达到最高.实时荧光定量RT-PCR检测结果表明,PD-1及配体PD-L 1/PD-L2在病毒感染后不同阶段转录量均有所升高,其中PD-1在病毒感染后第7天显著(P＜0.05)升高,在病毒感染后第3天PD-L1极显著(P＜0.01)升高,PD-L2显著(P＜0.05)升高.本研究成功建立了PD-1及配体PD-L 1/PD-L2实时荧光定量RT-PCR检测方法;并应用该方法初步分析了PD-1及配体PD-L1/PD-L2在IBDV感染不同阶段的转录变化,发现IBDV感染后不同阶段PD-1及配体PD-L 1/PD-L2的转录均升高,且PD-L1、PD-L2的转录先于PD-1升高,并与病毒载量呈正相关.