6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶的纯化与结晶条件

• 作者: 于浩 吴更 唐鸿志 胡传明 许平
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: HspB 重组表达 蛋白纯化 结晶初筛
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 1779-1784
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130785

摘要

[目的]在大肠杆菌中克隆表达尼古丁降解关键的6-羟基-3-琥珀酰吡啶单加氧酶基因hspB,纯化重组HspB蛋白并进行结晶条件的初步研究.[方法]从恶臭假单胞菌S16基因组中PCR扩增hspB基因,构建重组表达载体pET28a-hspB,并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达,利用亲和层析和凝胶过滤层析纯化重组蛋白.利用悬滴扩散法对HspB蛋白进行结晶条件筛选和优化.[结果]本文成功构建重组质粒pET28a-hspB并纯化获得达到结晶纯度的HspB蛋白.结晶条件初筛和优化后获得可培养HspB蛋白晶体的条件为0.2 mol/LNaCl、0.1 mol/L HEPESpH 7.5、1.1 mol/L (NH4)2SO4、4℃、加晶种.[结论]HspB蛋白纯化体系的构建和结晶条件的初步研究为从结构生物学的角度进一步研究HspB结构与功能的关系、定向进化提高HspB催化效率奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴更	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	14	11	2.0	3.0
2	许平	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	33	249	10.0	15.0
3	唐鸿志	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	18	105	6.0	10.0
4	于浩	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	4	14	3.0	3.0
5	胡传明	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	1	5	1.0	1.0