副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

• 作者: 张洋溢 张飞 文心田 曹三杰 都启晶 黄小波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖输出蛋白基因 克隆表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 621-630
• 页数: 10页
• 分类号: S852.61
• 字数: 8632字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.017

摘要

运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体.经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率.结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32a-CPEP; SDS-PAGE分析结果显示,得到约35 ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性.以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40％的保护率.重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础.