农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化

• 作者: 冯志勇 孙运奇 张津京 汪虹 陈明杰 陈辉
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: 斑玉蕈 农杆菌 EGFP 遗传转化
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 农业微生物
• 页码范围: 1793-1799
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.130784

摘要

[目的]将农杆菌介导的转化应用于重要的工厂化栽培食用菌斑玉蕈中,建立稳定的农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化技术.[方法]将构建的双元载体pYN6982转入农杆菌LBA4404菌株中,以斑玉蕈SIEF3133菌株打碎的双核菌丝为受体材料,利用根癌农杆菌介导的转化方法进行斑玉蕈转化试验.[结果]经潮霉素抗性筛选、PCR鉴定以及有丝分裂稳定性试验验证,表明潮霉素磷酸转移酶基因(hph)已经整合到斑玉蕈的基因组中;转基因斑玉蕈菌丝在荧光显微镜下可以观测到绿色荧光,表明增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)已经在转基因斑玉蕈菌株中获得了表达;通过PCR检测,随机挑选的8个转基因斑玉蕈菌株中有2个可以扩增出载体转移DNA (T-DNA)边界重复序列外的卡那霉素基因(kan)序列.[结论]获得了稳定遗传和表达的斑玉蕈转基因菌株,建立了农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化方法.农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化中,存在载体T-DNA边界重复序列之外的DNA序列转移到转基因斑玉蕈中的现象,有待进一步研究.