1株 asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌作为核酸疫苗载体的构建与鉴定

• 作者: 于斌 屈军乐 张科 彭晓 牛憨笨 罗语思 袁硕峰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 减毒鼠伤寒沙门氏菌 核酸疫苗载体 λ-RED同源重组
• 年，卷（期）: 2014,（7）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 663-668
• 页数: 6页
• 分类号: Q939.93
• 字数: 1969字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.07.001

摘要

目的：利用载体-宿主平衡致死系统，将1株香港分离的野生型沙门氏菌（S129）构建为减毒核酸疫苗载体。方法以细菌生化反应和血清学方法鉴定S129为鼠伤寒沙门氏菌；以λ-RED同源重组方法靶向敲除S129株的 asdA基因，并以卡那霉素抗性基因代替；通过菌落PCR鉴定后挑取阳性克隆 asdA缺陷型减毒鼠伤寒沙门氏菌（asdAΔS129），在含2，6-二氨基庚二酸（2，6-diaminopimelic acid ，DAP）或无DAP的LB培养基中培养，与野生株S129对比生长曲线以验证 asdAΔS129构建的成功；以S129和 asdAΔS129攻击BALB/c小鼠验证 asdAΔS129减毒情况；结果菌落PCR鉴定得到阳性克隆，asdAΔS129必需外源性添加DAP方能生长；asdAΔS129不能致死BALB/c小鼠，得到成功的减毒；结论成功将1株野生型沙门氏菌构建成 as d A缺陷型减毒核酸疫苗载体，并在体外和体内实验中验证，为下一步的疫苗呈递和肿瘤治疗实验提供了合适的载体。