吲哚胺2,3-双加氧酶基因修饰BMSCs在大鼠同种异体复合组织移植免疫排斥反应中的作用研究

• 作者: 方小兵 杨龙龙 王耀军 王耘川 白晓智 胡大海 贾文斌 贾艳慧 韩夫
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: BMSCs 吲哚胺2,3-双加氧酶 T淋巴细胞 同种异体复合组织移植 免疫排斥反应 大鼠
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 745-751
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20140166

摘要

目的 探讨吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)基因转染修饰大鼠BMSCs对同种异体复合组织移植免疫排斥反应的影响及其机制. 方法 以IDO过表达慢病毒IDO[绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)]-Lenti转染供体4～6周龄BN大鼠来源的第3代BMSCs,筛选目的基因高表达、具有生物活性的细胞株IDO-BMSCs.行RT-PCR、Western blot检测基因修饰前后BMSCs中IDO mRNA及蛋白表达,通过测量培养上清犬尿氨酸生成量检测IDO生物学活性.在混合淋巴细胞反应体系中以IDO-BMSCs、反应细胞(受体4～6周龄LEWIS大鼠来源外周血单个核细胞)和刺激细胞(供体BN大鼠来源外周血单个核细胞)混合培养,细胞比例分别为1∶5∶5、1∶10∶10、1∶50∶50及1∶100∶100(实验组1、2、3、4);每个反应体系另设IDO阻断孔,加入1 mmol/L IDO特异性抑制剂l-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT);以IDO-BMSCs与反应细胞(1∶5)培养为阴性对照组,刺激细胞与反应细胞(1∶1)培养为阳性对照组,IDO-BMSCs在RPMI 1640培养基中单独培养作为空白对照组.于培养5d,采用MTT法检测T淋巴细胞增殖情况.进一步制备大鼠同种异体肢体移植模型,将GFP-BMSCs(A组)、IDO-BMSCs(B组)及生理盐水(C组)分别经尾静脉输入移植模型,观察移植物存活时间及免疫排斥反应. 结果 基因修饰后,BMSCs中IDO mRNA及蛋白表达显著提高.IDO-BMSCs较GFP-BMSCs可明显提高培养上清中犬尿氨酸含量(P＜0.05).加入1-MT前,实验组1、2、3的T淋巴细胞增殖率随IDO-BMSCs与反应细胞比例逐渐减少而不断增加,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);实验组4的T淋巴细胞增殖率与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05).加入1-MT后,除实验组4的T淋巴细胞增殖率与加入前比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各实验组均高于加入前(P＜0.05).体内输入后,IDO-BMSCs可在移植物内定植,抑制免疫排斥反应的发生;A、B、C组移植物存活时间分别为(11.5±0.6)、(14.5±0.8)、(9.0±0.3)d,B组存活时间明显长于A、C组,A组长于C组(P＜0.05). 结论 IDOBMSCs可促进大鼠同种异体复合组织移植物的成活,其机制与抑制T淋巴细胞增殖、促进BMSCs向移植物内定植有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡大海		165	1002	15.0	20.0
2	王耀军		5	4	2.0	2.0
3	白晓智		27	101	6.0	8.0
4	王耘川		11	53	5.0	7.0
5	方小兵		3	2	1.0	1.0
6	杨龙龙		4	13	2.0	3.0
7	韩夫		5	48	3.0	5.0
8	贾艳慧		2	6	1.0	2.0
9	贾文斌		1	0	0.0	0.0