CD47-shRNA慢病毒载体构建及其介导Hep-2细胞CD47基因沉默效应鉴定

• 作者: 刘建国 刘月辉 刘红兵 张少容 徐莲 李黎 杨春平 汪美群 高树峰
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD47 RNA干扰 慢病毒载体 构建鉴定 Hep-2细胞
• 年，卷（期）: 2014,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R739.65
• 字数: 3577字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建CD47靶向shRNA慢病毒干扰载体,并观察其对Hep-2细胞CD47基因的抑制效应.方法 设计CD47靶点特异性的寡核苷酸序列,利用酶切反应合成含特异性系列线性化的pGCSIL-GFP载体,包装293T细胞产生慢病毒并行滴度测定,再转染人喉癌Hep-2细胞,通过实时荧光定量PCR及WesternBlotting检测重组慢病毒对CD47靶基因在mRNA和蛋白水平上的沉默抑制情况.结果 阳性克隆PCR及测序证实针对CD47基因shRNA慢病毒干扰载体构建成功,RT-PCR及Western Blotting检测载体在mRNA和蛋白水平上可抑制喉癌Hep-2细胞的CD47表达.结论 成功构建针对CD47基因的慢病毒干扰载体,为进一步行喉癌CD47基因功能研究提供了较好的实验工具.