徐淮山羊c-Myc基因启动子的克隆及其功能的初步分析

• 作者: 刘志永 左其生 张亚妮 朱睿 李东 李碧春 邱峰龙 韦光辉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: c-Myc基因 启动子 TSA NFAT1 SP1 定点突变 活性分析
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 533-540
• 页数: 8页
• 分类号: S827|S813.3
• 字数: 4780字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.004

摘要

本研究旨在确定徐淮山羊c-Myc基因启动子区域,找出该基因启动子的核心调控区,初步探讨c-Myc基因的表达调控机制.根据UCSC基因组数据库已公布的绵羊c-Myc基因的启动子序列,设计特异性PCR引物扩增c-Myc基因的一系列启动子缺失片段,定向克隆至pEGFP-N1和PGL3-c-Myc,分别转染gFF、COS7及P19细胞,并进行TSA和NFAT1诱导,同时对-402～-249 bp区域的转录因子SP1结合位点进行定点突变,最后进行双荧光报告基因活性检测.结果表明,徐淮山羊c-Myc基因5′侧翼区-1 334～+1 bp区域的启动子活性最强,-402～+1 bp区域为c-Myc基因启动子基本活性区域.进一步研究发现,-1 334～-971 bp、-587～-147 bp区域存在正调控元件,-1 976～-1 334 bp、-971～-587 bp区域存在负调控元件.TSA和NFAT1均能增强PMyc启动子的活性,SP1结合位点定点突变后,启动子活性降低.本试验通过构建包含c-Myc基因启动子不同片段的重组报告基因载体并比较其转录活性,确定了c-Myc基因启动子的核心区域,发现转录因子SP1是c-Myc基因启动子核心区域的调控元件,为进一步研究c-Myc基因的表达调控机制奠定了基础.