草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

• 作者: 丁燏 吴灶和 李杰 简纪常 谢吉国 闫秀英 鲁义善
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 草鱼肾组织细胞系 酵母双杂交 cDNA文库 蛋白质互作
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 128-133
• 页数: 6页
• 语种: 中文

摘要

旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用，运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK （Ctenopharyngodon idellus kidney）的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后，分离纯化mRNA，然后以mRNA为模板，反转录合成cDNA第一链，再在DNA聚合酶作用下，通过长距离PCR，扩增双链cDNA。利用SMART技术，通过同源重组的方法，在酵母株Y187中构建了草鱼CIK细胞全长cDNA文库。经检测，未扩增文库的转化率为1.6×105，文库容量为2.4×106，插入的双链cDNA片段的长度为250-2000 bp，文库滴度为7×107 CFU/mL，重组率为98%，此文库具有良好的cDNA片段多态性和完整性。利用构建的CIK酵母双杂交文库，以草鱼呼肠孤病毒的VP7和VP5蛋白作为诱饵进行筛选试验，得到VP7相互作用蛋白的阳性菌落，未得到VP5相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。