棉花叶肉原生质体分离及目标基因瞬时表达体系的建立

• 作者: 丁林云 张志远 李妮娜 郭旺珍
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 棉花 原生质体 PEG介导 转化 目标基因 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 231-239
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2014.00231

摘要

以棉花幼嫩子叶为材料,分析影响棉花叶肉原生质体分离及目标基因转化的主要因素,以棉花叶肉原生质体为受体,建立了稳定、高效的目标基因瞬时表达与鉴定体系.技术体系包括,选择自然生长12 d的棉花幼嫩子叶为材料,混合1.5％纤维素酶、0.4％离析酶、0.5 mol L-1甘露醇、20 mmol L-1 KCl、20 mmol L-1 MES、0.1 mol L-1 CaCl2和1.0 g L-1 BSA,在28℃黑暗条件下振荡酶解8h,可游离出浓度达1.0× 106 mL-1以上的纯净棉花叶肉原生质体.利用该方法将棉花锌指蛋白基因GhZFP2整合到pJIT 166-GFP质粒载体,构建了GhZFP2∶GFP融合载体,采用40％PEG-4000介导转化,获得高转化率的棉花叶肉原生质体.对目标基因瞬时表达产物检测表明,GhZFP2蛋白清晰定位在细胞核上.