发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定

• 作者: 尤爱国 杜燕华 胡小宁 许汴利 黄学勇
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 核蛋白 原核表达 抗原性
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 636-640
• 页数: 5页
• 分类号: R183.7
• 字数: 3835字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2014.05.011

摘要

目的：构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒（ SFTSV）核蛋白（ NP）基因的原核表达载体，获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法：提取病毒RNA，逆转录为cDNA后 PCR 扩增得到目的片段；通过连接pMD18-T构建克隆载体，测序正确后连接至原核表达载体pMAL-c2x中，转化大肠杆菌JM 109，IPTG诱导表达、纯化MBP-NP融合蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot对融合蛋白进行分析；建立间接ELISA方法对SFTSV患者血清NP抗体进行检测。结果：成功构建了NP基因的原核表达载体pMAL-c2x-NP，通过优化表达条件获得了纯化的带MBP标签的融合蛋白，经免疫印迹杂交证实重组蛋白具有抗原性。用建立的ELISA方法检测96例SFTSV患者血清，阳性率为40．6％；实时荧光定量RT-PCR 方法阳性率为55．2％，两者符合率为77．1％（ Kappa＝0．550， P＜0.001）。结论：成功构建了SFTSV NP基因的原核表达系统，诱导表达了具有抗原性的MBP-NP融合蛋白，为进一步研发SFTSV的ELISA诊断试剂盒奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许汴利	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	148	1187	16.0	24.0
3	黄学勇	河南省疾病预防控制中心传染病防治所	93	505	10.0	17.0
4	杜燕华	河南省疾病预防控制中心传染病防治所	22	210	8.0	14.0
7	尤爱国	河南省疾病预防控制中心传染病防治所	50	570	14.0	21.0
8	胡小宁	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	3	20	2.0	3.0