抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用

• 作者: 史涛 吕莎 曹畅 李哲 杨云 王显江 王生育 罗芳洪 颜江华
• 来源期刊: 中国医院药学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 神经菌毛素1 单克隆抗体 LOVO细胞株 促凋亡作用
• 年，卷（期）: 2014,（21）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1787-1791
• 分类号: R943
• 语种: 中文
• DOI: 10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2014.21.01

摘要

目的:研究抗人神经菌毛素1 (neuropilin 1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用.方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平.细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达.结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95％、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleavedcaspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱.结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡.