雪旺细胞对BMSCs来源内皮细胞分泌一氧化氮的作用研究

• 作者: 姜晓锐 张鑫鑫 江汕 蔡喜雨 裴国献
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 骨组织工程 BMSCs 血管化 神经化 一氧化氮 雪旺细胞 大鼠
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 998-1003
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20140220

摘要

目的 研究雪旺细胞(Schwann cells,SCs)对BMSCs来源内皮细胞分泌一氧化氮(nitric oxide,NO)功能的影响,为进一步探究组织工程骨成骨过程中神经因素对血管因素的作用奠定实验基础. 方法 取1日龄SD乳鼠坐骨神经及臂丛神经,体外分离获取SCs,采用S-100免疫组织化学染色鉴定;取2周龄SD大鼠胫骨及股骨骨髓,体外分离获取BMSCs,诱导分化成为内皮细胞,采用血管性血友病因子与CD31免疫荧光染色鉴定.采用Transwell共培养板对SCs与BMSCs来源内皮细胞进行非接触共培养作为实验组,单纯培养BMSCs来源内皮细胞作为对照组,分别于1、3、5、7d检测培养液中NO浓度,1、3、7、10d采用实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测一氧化氮合酶2(nitric oxide synthetase 2,NOS2)、NOS3 mRNA表达. 结果 分离及诱导分化的细胞通过形态学及免疫组织化学和免疫荧光染色鉴定为SCs和内皮细胞.实验组及对照组内各时间点间释放NO浓度比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);除3d外,其余各时间点实验组释放NO浓度均显著高于对照组(P＜0.05).RT-qPCR检测结果示,培养各时间点实验组NOS2 mRNA相对表达量均显著高于对照组(P＜0.05);两组内各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).除10d外,其余各时间点实验组NOS3 mRNA相对表达量均显著高于对照组(P＜0.05);实验组内各时间点间NOS3 mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(F=6.673,P=0.062),对照组内各时间点间比较差异均有统计学意义(F=36.581,P=0.000). 结论 SCs可促进BMSCs来源内皮细胞释放NO,可能与SCs促进NOS活性有关.