山羊iPS细胞诱导及培养体系的优化

• 作者: 左其生 李东 李伟 李碧春 邱峰龙 陈庭锋 韦光辉
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 饲养层 培养液 iPS细胞 山羊
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 740-749
• 页数: 10页
• 分类号: S827|Q343
• 字数: 6116字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.05.009

摘要

为了高效、持续的诱导获得并培养山羊诱导性多能干细胞(Induced pluripotent stem cells,iPS),本研究从饲养层和培养液方面进行优化.将分离获得3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)、山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×105 mL-1 MEF、1×105mL-1GEF、5×104mL-1MEF+5×104 mL-1 GEF的密度接种,以高糖DMEM+20％胎牛血清(FBS)和KnockoutD-MEM+20％血清替代物(KSR)为培养液,研究不同饲养层种类和培养液对山羊iPS细胞获得和培养的影响.结果显示,山羊iPS细胞在接种密度为5×104mL-1MEF+5×104 mL-1GEF的饲养层上,使用KnockoutDMEM+20％ KSR组合的培养液,山羊iPS细胞的诱导效率以及消化传代后的克隆形成率均极显著高于其他5组(P＜0.01).对该组培养的山羊iPS细胞进行碱性磷酸酶(AKP)染色呈阳性;Oct4、SSEA-1、Tra-1-60、Tra-1-81免疫荧光检测呈阳性;RT PCR检测有Oct4、Sox2、Klf4和Nanog基因的表达;体外能分化形成类胚体.结果表明,将细胞接种在密度为5×104mL-1MEF+5×104 mL 1GEF的饲养层上,使用KnockoutDMEM+20％KSR的培养液更适合山羊iPS细胞的获得和培养.本试验为山羊iPS细胞的体外研究、临床试验、动物基因组修饰和山羊胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ES)的建系奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李碧春	扬州大学动物科学与技术学院	189	1267	18.0	27.0
2	李伟	扬州大学动物科学与技术学院	59	185	8.0	10.0
3	左其生	扬州大学动物科学与技术学院	13	29	2.0	5.0
4	邱峰龙	扬州大学动物科学与技术学院	7	15	3.0	3.0
5	韦光辉	扬州大学动物科学与技术学院	6	9	1.0	3.0
6	李东	扬州大学动物科学与技术学院	3	18	2.0	3.0
7	陈庭锋	扬州大学动物科学与技术学院	5	7	2.0	2.0