单核细胞增生李斯特菌 sRNA 伴侣分子 hfq的基因克隆、表达及纯化

• 作者: 乔军 刘田莉 孟庆玲 彭叶龙 才学鹏 谢堃 陈创夫 陈诚 马玉
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 单核细胞增生李斯特菌 hfq基因 sRNA伴侣分子 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 80-84
• 页数: 5页
• 分类号: S852|Q78
• 字数: 3526字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2014.05.014

摘要

为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因，并纯化重组蛋白，通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因，将扩增产物克隆于pMD18-T载体中，测序验证后，再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a（＋）中，成功构建pET-32a（＋）-hfq原核表达载体。然后，转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，通过IPTG进行诱导表达，对表达蛋白进行可溶性分析，并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示：克隆的hfq基因全长234 bp，编码77个氨基酸，通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带；并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。