乙型脑炎病毒的生物反应器培养及其灭活和纯化

• 作者: 刘岩 吴洋 李春艳 杨屹 苑志刚 陈立新 韩慧丽
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型脑炎病毒 灭活疫苗 Vero细胞 生物反应器 柱层析
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1309-1312
• 分类号: R373.3+1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 利用NBS 14 L篮式生物反应器大规模培养乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),并对病毒收获液进行灭活和纯化,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供参考.方法 用NBS 14 L篮式生物反应器,以片状载体FibralCel DISK I为载体,进行Vero细胞高密度培养,分别按0.0l、0.1和0.3 MOI接种JEV(P3V2)毒种,灌流培养,收获3批病毒液,检测病毒滴度;分别使用不同浓度的甲醛(100、200、400 ng/ml)于4、25℃和不同浓度的β-丙内酯(β-丙内酯∶病毒液分别为1∶2000、1∶4000、1∶8000)于4℃对病毒收获液进行灭活,取灭活后的病毒液,接种昆明小鼠,验证病毒灭活效果;用截留相对分子质量为10万的超滤器对病毒收获液进行超滤浓缩,用Sepharose 4FF层析柱对病毒浓缩液进行层析纯化.结果 共培养3批Vero细胞,平台期密度约为1.6× 107个/ml.3批病毒收获液的滴度分别为8.4、8.1和7.9 lgLD50/ml.以甲醛为灭活剂,作用浓度为200 ng/ml,温度为4℃时,作用7d可完全灭活病毒,且免疫原性合格;以β-丙内酯为灭活剂,作用浓度为1∶4000,温度为4℃时,作用12h可完全灭活病毒,且免疫原性合格.3批病毒浓缩液病毒液经Sepharose 4FF层析柱层析纯化后,蛋白去除率达99％以上,抗原回收率在95％以上,Vero细胞蛋白质残留量和DNA残留量均符合《中国药典》三部(2010版)的相关规定.结论 成功实现了JEV的大规模生物反应器培养,层析纯化后病毒的抗原回收率较高,为乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的大批量生产提供了参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨屹		11	14	2.0	2.0
2	陈立新		4	5	1.0	2.0
3	李春艳		4	3	1.0	1.0
4	刘岩		2	3	1.0	1.0
5	苑志刚		2	3	1.0	1.0
6	韩慧丽		1	3	1.0	1.0
7	吴洋		1	3	1.0	1.0