牛源性无乳链球菌分离鉴定及 cfb 基因的克隆和真核表达载体的构建

• 作者: 张勇 王华 赵兴绪 阚威 马友记
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 奶牛隐性乳房炎 无乳链球菌 cfb基因 真核载体构建
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 39-44
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4294字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2014.05.008

摘要

为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗，采集隐性奶牛乳房炎奶样，利用THB （ Todd-Hewitt Broth ）固体选择培养基和色素试验，并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb，采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列，经ORF分析和B细胞表位预测，利用Primer 5．0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物，添加酶切位点和真核表达元件，以分离株无乳链球菌的基因组为模板，PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序，经测序确定无误后，连接pcDNATM 3．1 V5-His A（ pcDNA-cfb）真核载体，转化DH5α感受态细胞，提取重组质粒进行酶切和测序鉴定。结果显示，从89份隐性奶牛乳房炎奶样中分离得到8株无乳链球菌，成功构建了真核表达载体（ pcDNA-cfb）。 THB和色素试验初步筛选，可以作为快速分离无乳链球菌的一种方法，利用Bcepred和Lasergene-Protean软件对分离得到的无乳链球菌cfb基因序列分析，在所克隆的cfb基因序列内有多个优势抗原表位，因此，有望作为无乳链球菌基因工程疫苗研制的抗原靶标基因序列，为进一步研究其基因工程疫苗提供基础条件。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵兴绪	甘肃农业大学动物医学院	178	766	13.0	19.0
2	张勇	甘肃农业大学动物医学院	147	410	9.0	11.0
3	马友记	甘肃农业大学动物科学技术学院	83	410	11.0	17.0
4	王华	甘肃农业大学动物医学院	9	58	4.0	7.0
5	阚威	甘肃农业大学动物医学院	4	14	2.0	3.0