基于纳米材料电化学免疫传感器检测禽呼肠孤病毒研究

• 作者: 刘加波 庞耀珊 滕丽琼 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 石墨烯 电化学免疫传感器 金纳米粒子 银纳米粒子 禽呼肠孤病毒 禽呼肠孤病毒单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 1006-1012
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.05.017

摘要

【目的】构建一种用于检测禽呼肠孤病毒(ARV)的新型电化学免疫传感器。【方法】将石墨烯(G)和甲壳胺(Chi)分散在乙酸溶液中得到均匀的混合物后，加入HAuCl 4溶液于80℃还原成金纳米粒子（AuNPs），得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子(G-Chi-AuNPs)纳米复合物。将石墨烯(G)和甲壳胺(Chi)分散在乙酸溶液中得到均匀的混合物后，先加入AgNO 3溶液于80℃还原成银纳米粒子（AgNPs），再加入禽呼肠孤病毒单克隆抗体(ARV-MAb)，得到石墨烯-甲壳胺-银纳米粒子-禽呼肠孤病毒单克隆抗体（G-Chi-AgNPs-ARV-MAb）纳米复合物。将G-Chi- AuNPs纳米复合物修饰金电极作为传感器平台，固定待检测样品，然后加入G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物，并对G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物的孵育时间进行优化，构建了ARV电化学免疫传感器。使用构建的ARV电化学免疫传感器，对禽流感（H5N1、H3N6和H9N2亚型）、新城疫病毒（NDV）、喉气管炎病毒（LTV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和传染性法氏囊病毒(IBDV)进行检测，以确定ARV电化学免疫传感器的特异性。使用构建的ARV电化学免疫传感器，对106.5-100.5 TCID 50/mL的病毒进行检测，以确定ARV电化学免疫传感器的敏感性试验。使用构建的ARV电化学免疫传感器，对临床样品进行检测，其确定ARV电化学免疫传感器的实用性。【结果】所建立的ARV电化学免疫传感器，G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物的最佳孵育时间为40 min。当检测的样品为阳性时，ARV与ARV-MAb特异结合，G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物被固定到电极的表面使其线性伏安曲线出现AgNPs的氧化峰；当检测样品为阴性时，其线性伏安曲线不出现AgNPs的氧化峰。特异性结果表明，所建立的方法仅对ARV的检测为阳性（出现AgNPs的氧化峰），而对非目标禽流感（H5N1、H3N6和H9N2亚型）、NDV、LTV、IBV和 IBDV的检测为阴性（不出现AgNPs的氧化峰）。敏感性结果表明，所构建的ARV电化学免疫传感器，具有很高的敏感性，对ARV检测的敏感性达101.5 TCID 50/mL。使用建立的ARV电化学免疫传感器对22份临床样品进行检测，结果与病毒分离方法相符。【结论】所建立的ARV电化学免疫传感器，具有特异性强、敏感度高及快速的特点，为有效检测诊断禽呼肠孤病毒提供了一种新的快速检测诊断技术。