胶原包被条件对血管性血友病因子胶原结合法测定FⅧ制品中血管性血友病因子的影响

• 作者: 叶生亮 曹海军 李长清 杜晞 林方昭 王宗奎 袁靖
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管性血友病因子 胶原结合法 FⅧ制品 包被条件
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1333-1337
• 分类号: R554+.1|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 通过考察不同胶原包被条件对血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)与胶原结合的影响,建立vWF胶原结合法(vWF collagen binding assay,vWF:CBA)检测FⅧ制品中vWF活性.方法 将胶原Ⅲ分别按以下4组条件包被ELISA板:不同pH(2.8、4.0、5.2、6.4、7.4、8.8、9.8)的缓冲液,不同盐浓度(0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.3、0.4、0.6 mol/L NaCl)的缓冲液,不同胶原Ⅲ浓度(5、2.5、1、0.5、0.25、0.125 μg/ml),不同包被温度(4、25、37℃).以5个不同稀释度的vWF标准品为样品,进行vWF:CBA法测定,每种包被条件下绘制1条标准曲线,同时检测每种包被条件下方法的重复性.将标准曲线线性和方法重复性较好的几组条件做为最佳包被条件,验证该包被条件下vWF:CBA法的特异性、重复性,获得标准曲线范围.结果 当胶原Ⅲ溶解于含0.15 mol/L NaCl,pH6.4的磷酸缓冲液中,在4℃条件下以2.5 μg/ml包被时,vWF与胶原的结合效率较高.将该包被条件下的vWF:CBA法用于测定冷沉淀上清及FⅧ制品中vWF活性,具有较好的特异性和重复性.结论 不同的包被条件对胶原结合法测定vWF活性具有较大的影响,因此,在采用胶原结合法测定FⅧ制品中vWF活性时,应对包被条件进行优化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杜晞	中国医学科学院输血研究所	5	14	3.0	3.0
2	叶生亮	中国医学科学院输血研究所	12	21	3.0	3.0
3	王宗奎	中国医学科学院输血研究所	12	36	3.0	5.0
4	曹海军	中国医学科学院输血研究所	17	62	4.0	7.0
5	林方昭	中国医学科学院输血研究所	24	116	5.0	10.0
6	袁靖		9	14	2.0	3.0
7	李长清	中国医学科学院输血研究所	52	149	6.0	8.0