肺炎链球菌丝氨酸-苏氨酸激酶基因的原核表达及免疫血清的制备

• 作者: 刘美玲 屈平华 张汉运 张轩 李有强 陈东成 陈兴文
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺炎链球菌 丝氨酸-苏氨酸激酶 免疫血清
• 年，卷（期）: 2014,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 485-487
• 分类号: R378.99
• 语种: 中文

摘要

目的 制备抗肺炎链球菌(S.pn)丝氨酸-苏氨酸激酶(STKP)基因的特定区域的免疫血清,为疫苗研究奠定基础.方法 PCR扩增S.pn STKP蛋白C末端314个氨基酸区域的基因,将其克隆入pMD19-T载体,将鉴定正确的STKP基因从pMD19-T载体亚克隆至PET-32a(+)原核表达载体进行诱导表达;获得的可溶性蛋白经Ni2+柱纯化及Western blot鉴定后,免疫家兔制备抗STKP血清,间接EHSA鉴定抗体效价,Western blot鉴定免疫血清特异性.结果 成功将STKP基因特定序列克隆入PET-32a(+)原核表达载体并诱导表达,形式以可溶性表达为主,经Ni2+柱层析法纯化STKP,纯度达92％,免疫家兔制备出STKP免疫血清,间接ELISA检测抗体效价为1∶100 000,Western blot证实免疫血清能与目的蛋白特异结合.结论 获得STKP重组蛋白及免疫血清,重组表达产物具有免疫原性,为S.pn多价联合蛋白疫苗研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李有强	广东省中医院检验科	23	71	5.0	7.0
2	张轩	广东省中医院检验科	12	46	4.0	6.0
3	屈平华	广东省中医院检验科	43	198	8.0	12.0
4	陈东成	广州市白云区第二人民医院内科	15	31	4.0	5.0
5	刘美玲	广州医科大学附属第三医院检验科	8	18	3.0	4.0
6	张汉运	广东省中医院检验科	1	0	0.0	0.0
7	陈兴文	广东省中医院检验科	1	0	0.0	0.0