人组蛋白α-氨基乙酰基转移酶Nat11表达纯化、晶体生长及底物结合研究

• 作者: 李海涛 黄嘉欣
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: α-氨基乙酰基转移酶11 重组蛋白表达 蛋白聚集 酶-底物结合 晶体生长
• 年，卷（期）: 2014,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 193-200
• 页数: 8页
• 语种: 中文

摘要

α-氨基乙酰基转移酶11（Nat11）催化组蛋白H4和H2A氨基端乙酰化修饰，发挥着重要的表观遗传调控功能。将人Nat11基因构建到原核表达载体pSUMO中，转化入大肠杆菌BL21（DE3）进行重组表达。通过镍柱亲和层析等一系列体外纯化步骤，获得高纯度Nat11。利用等温滴定量热法（ITC），测得Nat11与底物多肽微摩尔量级结合常数。利用质谱技术，发现纯化后的Nat11结合有大肠杆菌内源产生的乙酰辅酶A或辅酶A，在ITC滴定过程中可以产生对多肽底物的乙酰化修饰，表明纯化获得的Nat11在溶液中具有酶活力。随后，对Nat11进行晶体生长研究，通过初筛优化获得蛋白截短体及底物-酶融合蛋白单晶。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李海涛	清华大学医学院基础医学系	9	8	2.0	2.0
2	黄嘉欣	清华大学医学院基础医学系	1	0	0.0	0.0