软骨细胞复合人脐带Wharton胶取向支架的体外评估

• 作者: 刘舒云 卢世璧 吕涵宁 张莉 徐国娇 盖昱辛 赵鹏 郭全义 陈礼
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 软骨组织工程 人脐带Wharton胶 取向支架 软骨细胞
• 年，卷（期）: 2014,（8）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 1017-1022
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20140223

摘要

目的 将软骨细胞复合于人脐带Whanon胶取向支架,体外评估该支架对软骨细胞的影响和作用.方法 取成年新西兰大白兔肩关节软骨组织分离培养软骨细胞.取正常新生儿脐带组织,通过湿润粉碎结合化学脱细胞技术脱细胞,利用冷冻干燥及交联等技术制备人脐带Wharton胶取向支架.取第2代软骨细胞与人脐带Wharton胶取向支架复合培养,倒置显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上分布及黏附情况;甲苯胺蓝、番红O染色观察细胞细胞外基质分泌情况;二乙酰荧光素-碘化丙啶双色荧光检测法染色及Hoechst33258染色评估细胞在支架上的活力及增殖情况;将体外PKH26荧光标记的软骨细胞与支架复合培养,荧光显微镜观察. 结果 倒置显微镜观察示,培养3d细胞在支架孔隙内分布较均匀,呈圆形或椭圆形;扫描电镜观察示,培养7d大量细胞黏附于支架孔隙间,呈圆形或椭圆形,且细胞沿取向孔道伸展排列,相互聚集,增殖旺盛;组织学观察示,培养7d,细胞在支架中分布均匀且增殖旺盛,细胞分泌大量细胞外基质,取向支架能引导细胞迁徙和增殖,并能有效保留和促进细胞外基质分泌;细胞活力评估结果示,培养3d见支架上黏附的大部分细胞为活细胞,细胞成活率高达90％以上.荧光显微镜观察示,荧光标记细胞与支架复合培养1d,细胞在支架内部均匀分布,增殖旺盛. 结论 人脐带Wharton胶取向支架具有良好的亲和性和细胞相容性,有利于软骨细胞黏附和增殖,细胞存活率高,是一种比较理想的软骨组织工程支架材料.