利用改进的聚合酶链反应方法鉴定芳香烃受体敲除小鼠

• 作者: 严军 唐婉琦 张醇 杨雪 梁华平 范霞
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 芳香烃受体敲除小鼠 基因分型
• 年，卷（期）: 2014,（16）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1761-1763
• 分类号: R394-33
• 语种: 中文

摘要

目的 改进常规的基因分型技术,以更准确、直观地鉴定芳香烃受体敲除(aryl hydrocarbon receptor knockout,AhR KO,AhR-/-)小鼠.方法 剪取AhR杂合子(heterozygous,+/-)后代仔鼠脚趾,常规提取基因组脱氧核糖核酸,分别采用传统和改进的PCR方法对其基因型进行鉴定,并对结果进行比较,同时分析在试剂总量不变的情况下两种方法获得的基因分型结果的准确性和直观性.结果 在反应体系调整为10 μL、退火温度和时间改为65.5℃40 s、其余PCR参数(预变性温度和时间为94℃3 min;变性和延伸温度及时间分别为94℃30 s,72℃1 min,该步骤循环35次;最后一步延伸温度和时间为72℃5 min;样本保存温度为4℃)不变的情况下,采用双体系运转的改进PCR法结果比传统PCR法直观,而且总的试剂用量与传统PCR法相等.结论 改进的PCR法可以更好地鉴定AhR KO小鼠表型,适合在基因分型工作中推广.