表达microRNA-203 tough decoy的慢病毒载体构建及应用

• 作者: 付楠楠 刘涛 吴本娟 宋红丽 沈中阳 王玉亮
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 间质干细胞 慢病毒属 遗传载体 质粒 细胞凋亡 微RNAs 细胞活性 miRNA-203 tough decoy
• 年，卷（期）: 2014,（10）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 961-964
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2014.10.001

摘要

目的：建立表达microRNA（miRNA）tough decoy（TuD）的慢病毒载体构建方法，并检测其对细胞内miRNA表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆，首先构建miRNA TuD通用骨架质粒，进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后，感染大鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs），同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒，感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化，并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体，并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低，同时细胞活性增高，凋亡比例降低，与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建miRNA TuD表达载体是一种简便高效的方法，其表达产物能够有效抑制细胞内源性miRNA水平，同时影响细胞表型。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王玉亮	天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室	46	145	7.0	9.0
2	刘涛	天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室	10	19	3.0	4.0
6	宋红丽		1	0	0.0	0.0
7	付楠楠	天津医科大学一中心临床学院	4	7	2.0	2.0
8	吴本娟	天津医科大学一中心临床学院	4	13	3.0	3.0
9	沈中阳		1	0	0.0	0.0