腺病毒介导血管内皮生长因子转染脐带间充质干细胞的实验研究

• 作者: 刘素蕊 宋光耀 朱旅云 李晓玲 王超 邢邯英
• 来源期刊: 解放军医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子类 脐带间质干细胞 腺病毒载体 转染
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: R349.8
• 字数: 4003字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-140X.2014.05.002

摘要

目的：探讨腺病毒载体介导血管内皮生长因子( VEGF)转染脐带间充质干细胞( UCMSCs)的可行性,以及VEGF转染对UCMSCs功能的影响。方法构建VEGF165-EGFP基因重组腺病毒载体,分离和培养UCMSCs,携增强型绿色荧光蛋白( EGFP)的腺病毒载体转染UCMSCs,倒置荧光显微镜下观察细胞转染效果,流式细胞仪检测细胞转染率,确定最佳病毒感染复数( MOI)。将细胞分为VEGF-EGFP转染组、EGFP空载组及对照组3组,依据最佳MOI值转染并收集细胞,采用蛋白印迹法( Western blotting)检测VEGF及Akt表达变化；酶联免疫吸附试验( ELISA)检测VEGF蛋白表达情况。采用CCK-8法评价转染对UCMSCs增殖的影响。结果腺病毒介导的VEGF165-EGFP基因能够成功转染UCMSCs,且VEGF基因在细胞内能够转录和表达,并能分泌到细胞外。转染后48 h VEGF-EGFP转染组VEGF、Akt水平显著高于EGFP空载组和对照组(P<0．05)；转染后48 h采用ELISA法在VEGF-EGFP转染组细胞培养上清中即检测到VEGF的表达和分泌,在转染后第4天达到高峰,且VEGF表达显著高于EGFP空载组及对照组(P<0．01),以后逐渐下降,并稳定表达一定时间。 CCK-8法检测结果显示,介导VEGF基因转染的腺病毒对UCMSCs增殖无明显影响。结论腺病毒介导VEGF基因能够成功转染UCMSCs,保持其原有生物学特性,并能持续高效表达VEGF,为通过VEGF基因联合UCMSCs治疗获得糖尿病下肢血液循环重建的可行性提供理论依据。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋光耀	河北省人民医院内分泌科	302	1700	17.0	25.0
2	邢邯英	河北省人民医院内分泌科	64	229	8.0	11.0
3	李晓玲	解放军白求恩国际和平医院内分泌科	26	168	8.0	11.0
4	朱旅云	解放军白求恩国际和平医院内分泌科	46	232	9.0	11.0
5	王超	河北省人民医院内分泌科	83	373	10.0	14.0
6	刘素蕊	解放军白求恩国际和平医院输血科	8	24	3.0	4.0