检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法建立及初步应用

• 作者: 刘玉卓 李祥瑞 李银 谢星星 赵冬敏 韩凯凯 黄欣梅
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 坦布苏病毒 鹅 双抗体夹心ELISA
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 24-30
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5196字
• 语种: 中文

摘要

以鹅源坦布苏病毒JS804毒株制备的多克隆抗体为捕获抗体,抗鹅坦布苏病毒NS1蛋白的单克隆抗体4A9作为检测抗体,建立了检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法.该方法的最佳反应条件为:兔抗鹅坦布苏病毒多克隆抗体的最适稀释度为1:1600,单克隆抗体的最适稀释度为1:160,样品反应时间为1h,酶标羊抗鼠二抗工作浓度为1:5000,以OD450nm＞0.245作为阳性判定标准.该方法的板间、板内重复性变异系数小于10％,病毒最低检测量为386.25TCID5o/0.1 mL,与新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸭肝炎病毒(DHV)和鹅细小病毒(GPV)无交叉反应.应用该方法与RT-PCR方法同时检测22份临床样品,符合率达到86.36％.结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于坦布苏病毒的快速检测.