人羊膜间充质干细胞分离培养：胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择

• 作者: 丛姗 刘俊平 宋瑾 张惠娟 曹贵方 梁美萍 黄利刚
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 培养 间充质干细胞 羊膜间充质干细胞 细胞培养 胰蛋白酶 胶原酶 863项目
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法 -- 干细胞培养与分化
• 页码范围: 944-949
• 页数: 6页
• 分类号: R394.2
• 字数: 8482字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.06.020

摘要

背景：文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致，得到的细胞数量各不相同。目的：探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。<br>　　方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一：分别采用3种方法：0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min；0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min；0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二：采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三：分别采用2种方法：0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后，再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min；0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四：采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后，再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态，研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的最适方法。<br>　　结果与结论：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min，然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是最合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形，胞质丰富，细胞核呈圆形，1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适，而且胶原酶的浓度合适，得到的细胞数量最多。